ACTIVACIÓN SINTÉTICA DE RECEPTORES TRANSMEMBRANA MULTIMÉRICOS

Solicitante

Inventores (4)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

La presente divulgación se refiere a enfoques sintéticos sobre la base de péptidos de afinidad para impulsar el ensamblaje y la activación de complejos de receptores transmembrana. La presente divulgación se refiere además al complejo de receptores central NFR1-NFR5 que inicia el programa de organogénesis de los nódulos radiculares corticales y el programa epidérmico, así como a la identificación de complejos receptores de cebada que funcionan en la simbiosis de los nódulos radiculares. Reivindicación 1: Una célula genéticamente modificada que comprende: un complejo de receptores transmembrana (TM) que comprende un polipéptido de la primera subunidad y un polipéptido de la segunda subunidad, donde el polipéptido de la primera subunidad comprende un polipéptido de afinidad que se une al polipéptido de la segunda subunidad de manera intracelular mediante la introducción de oligomerización; y donde la oligomerización del polipéptido de la primera subunidad y el polipéptido de la segunda subunidad activa la señalización del receptor TM, donde el polipéptido de afinidad es heterólogo con respecto al polipéptido de la primera subunidad. Reivindicación 9: Un polipéptido de afinidad biespecífico que comprende: un primer polipéptido de afinidad que se une a una porción intracelular de un polipéptido de la primera subunidad de un receptor TM; y un segundo polipéptido de afinidad que se une a una porción intracelular de un polipéptido de la segunda subunidad del receptor TM; donde la unión del primer polipéptido de afinidad al polipéptido de la primera subunidad y del segundo polipéptido de afinidad al polipéptido de la segunda subunidad induce la oligomerización; y donde la oligomerización del polipéptido de la primera subunidad y el polipéptido de la segunda subunidad activa la señalización del receptor TM. Reivindicación 13: Un método de cribado de complejos de receptores transmembrana (TM) que comprende: (a) proporcionar una célula que expresa un polipéptido de la primera subunidad de un receptor TM; (b) expresar un polipéptido de la segunda subunidad de un receptor TM en la célula; y (c) ensayar la célula para detectar un fenotipo de receptor TM; y donde (i) la presencia del fenotipo de receptor TM indica que el polipéptido de la primera subunidad y el polipéptido de la segunda subunidad se oligomerizan para formar el receptor TM; o (ii) la ausencia del fenotipo de receptor TM indica que el polipéptido de la primera subunidad y el polipéptido de la segunda subunidad no se oligomerizan para formar un receptor TM, y donde (1) el polipéptido de la segunda subunidad comprende un polipéptido etiqueta, el polipéptido de la primera subunidad comprende un polipéptido de afinidad que se une al polipéptido etiqueta, y el polipéptido de afinidad es heterólogo con respecto al polipéptido de la primera subunidad, o (2) el polipéptido de la primera subunidad comprende el polipéptido etiqueta, el polipéptido de la segunda subunidad comprende el polipéptido de afinidad que se une al polipéptido etiqueta, y el polipéptido de afinidad es heterólogo con respecto al polipéptido de la segunda subunidad. Reivindicación 18: Una planta genéticamente modificada o parte de dicha planta que comprende la célula vegetal genéticamente modificada de la reivindicación 1 y/o el polipéptido de afinidad biespecífico de la reivindicación 9. Reivindicación 20: Un método para preparar la célula vegetal genéticamente modificada de la reivindicación 1, que comprende introducir una alteración genética en la célula vegetal que comprende una primera secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido heterólogo de la primera subunidad que comprende un polipéptido de afinidad; y/o introducir una alteración genética en la célula vegetal que comprende una segunda secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido heterólogo de la segunda subunidad que opcionalmente comprende un polipéptido etiqueta; o que comprende modificar genéticamente la célula vegetal mediante la transformación de la célula vegetal con uno o más componentes de edición génica que se dirigen a una primera secuencia de genoma nuclear endógena que codifica el polipéptido de la primera subunidad, donde el polipéptido de la primera subunidad está genéticamente modificado para comprender el polipéptido de afinidad; y/o modificar genéticamente la célula vegetal mediante la transformación de la célula vegetal con uno o más componentes de edición génica que se dirigen a una segunda secuencia de genoma nuclear endógena que codifica el polipéptido de la segunda subunidad, donde el polipéptido endógeno de la segunda subunidad está genéticamente modificado para comprender un polipéptido etiqueta. Reivindicación 21: Un vector de expresión o una molécula de ADN aislada que comprende una o más secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido de la primera subunidad de un receptor TM que comprende un polipéptido de afinidad, donde el polipéptido de afinidad es heterólogo con respecto al polipéptido de la primera subunidad, y donde las una o más secuencias de nucleótidos están operativamente unidas a por lo menos una secuencia de control de expresión; una o más secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido de la segunda subunidad de un receptor TM que opcionalmente comprende un polipéptido etiqueta, donde las una o más secuencias de nucleótidos están operativamente unidas a por lo menos una secuencia de control de expresión; una o más secuencias de nucleótidos que codifican: (a) un polipéptido de la primera subunidad de un complejo de receptores transmembrana (TM) que comprende un polipéptido de afinidad, donde el polipéptido de afinidad es heterólogo con respecto al polipéptido de la primera subunidad; y/o (b) un polipéptido de la segunda subunidad de un receptor TM que opcionalmente comprende un polipéptido etiqueta, donde las una o más secuencias de nucleótidos están operativamente unidas a por lo menos una secuencia de control de expresión; y/o una o más secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido de afinidad biespecífico que comprende un primer polipéptido de afinidad que se une a una porción intracelular de un polipéptido de la primera subunidad de un receptor TM, Dirección de Gestión Digital e Información Tecnológica BOLETÍN DE PATENTES Nº 1424 - 12 De Marzo De 2025 65 y un segundo polipéptido de afinidad que se une a una porción intracelular de un polipéptido de la segunda subunidad de un receptor TM, donde las una o más secuencias de nucleótidos están operativamente unidas a por lo menos una secuencia de control de expresión. Reivindicación 22: Una célula bacteriana o una célula de Agrobacterium que comprende el vector de expresión o una molécula de ADN aislada de la reivindicación 21. Reivindicación 23: Una planta, parte de planta, célula vegetal o semilla genéticamente modificada que comprende el vector de expresión o una molécula de ADN aislada de la reivindicación 21. Reivindicación 24: Un equipo que comprende el vector de expresión o una molécula de ADN aislada de la reivindicación 21 o la célula bacteriana o la célula de Agrobacterium de la reivindicación 22. Reivindicación 25: Un método para activar un complejo de receptores transmembrana (TM) diana o inducir la organogénesis, que comprende: introducir una alteración genética a través de un vector de expresión o una molécula de ADN aislada de la reivindicación 21 en una célula. Reivindicación 26: Una célula vegetal genéticamente modificada que comprende: un complejo de receptores NFR1-NFR5 que comprende un polipéptido de la primera subunidad y un polipéptido de la segunda subunidad, donde el polipéptido de la primera subunidad comprende un polipéptido de afinidad que se une al polipéptido de la segunda subunidad de modo de inducir la oligomerización, y donde el polipéptido de afinidad es heterólogo con respecto al polipéptido de la primera subunidad; y donde la oligomerización del polipéptido de la primera subunidad y el polipéptido de la segunda