CRIBADO DE ALTO RENDIMIENTO PARA VARIANTES GENÉTICAS ASOCIADAS A UNA BAJA ESTATURA

Solicitante

Inventores (2)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

La presente divulgación, se refiere, en general, al uso de un método de cribado de alto rendimiento para identificar mutaciones genéticas en genes, p. ej., el gen del receptor 2 del péptido natriurético (NPR2), asociados con disfunción del CNP y trastornos de baja estatura, y métodos de tratamiento de trastornos de baja estatura. Reivindicación 1: Un método para identificar un gen variante asociado con la baja estatura que es una variante de ganancia de función (GoF) o pérdida de función (LoF) que comprende: transfectar células que comprenden una construcción de expresión de indicadores de GMPc-GFP con un vector lentiviral que expresa un polinucleótido que codifica una proteína variante asociada con la baja estatura vinculada operativamente a una o más secuencias de códigos de barras únicos; poner en contacto las células en cultivo con el péptido natriurético de tipo c (CNP) o una variante del mismo con actividad CNP; clasificar las células del cultivo en función del nivel de expresión de GFP producido por la célula; e identificar la proteína variante asociada con la baja estatura como una variante de GoF o una variante de LoF, en donde una variante de GoF tiene un nivel más alto de producción de GMPc en comparación con un control, y en donde una variante de LoF tiene un nivel más bajo de producción de GMPc en comparación con un control. Reivindicación 3: Un método para identificar una variante de NPR2 como una variante de ganancia de función (GoF) o pérdida de función (LoF) que comprende: transfectar células que comprenden una construcción de expresión de indicadores de GMPc-GFP con un vector lentiviral que expresa un polinucleótido que codifica una proteína variante de NPR2 vinculada operativamente a una o más secuencias de códigos de barras únicos; poner en contacto las células en cultivo con el péptido natriurético de tipo c (CNP) o una variante del mismo con actividad CNP; clasificar las células del cultivo en función del nivel de expresión de GFP producido por la célula; e identificar la variante de NPR2 como una variante de GoF o una variante de LoF, en donde una variante de GoF tiene un nivel más alto de producción de GMPc en comparación con un control, y en donde una variante de LoF tiene un nivel más bajo de producción de GMPc en comparación con un control. Reivindicación 17: Un vector lentiviral que comprende un polinucleótido que codifica un gen variante asociado con la baja estatura, un polinucleótido que codifica un gen de resistencia a puromicina y un polinucleótido que codifica un promotor de T2A-BFP. Reivindicación 19: Un vector lentiviral que comprende un polinucleótido que codifica una variante de NPR2, un polinucleótido que codifica un gen de resistencia a puromicina y un polinucleótido que codifica un promotor de T2A-BFP.