DERIVACIÓN DE CÉLULAS MADRE INGENUAS BOVINAS CON EL USO DE CÉLULAS ALIMENTADORAS

Solicitante

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

La presente divulgación se refiere a métodos, productos y composiciones útiles para la derivación de células madre ingenuas bovinas y el establecimiento y mantenimiento de líneas de células madre ingenuas bovinas. En particular, la divulgación se refiere a métodos de métodos de derivación de células madre ingenuas bovinas, opcionalmente con el uso de microgotas de capas de células alimentadoras, y métodos de generación de células madre ingenuas bovinas a partir de células madre no ingenuas bovinas, así como también medios de crecimiento y medios de restablecimiento formulados especialmente para derivar y mantener células madre ingenuas bovinas. Las células madre ingenuas bovinas se pueden usar para programas de mejoramiento in vitro que incluyen la multiplicación de embriones de preimplantación con características genéticas deseables, la derivación de células germinales primordiales / gametos que se incluyen para programas de mejoramiento in vitro, y el desarrollo y administración de productos biológicos y terapéuticos médicos veterinarios. Reivindicación 1: Un método de derivación de una población de células madre ingenuas bovinas a partir de un embrión bovino, que comprende: a) proporcionar una capa de células alimentadoras; b) aislar células de un embrión bovino para obtener una población de células que comprenden células similares a las células madre ingenuas bovinas; c) opcionalmente, disociar la población de células que comprenden células similares a las células madre ingenuas bovinas para obtener uno o más conjuntos de células que comprenden células similares a las células madre ingenuas bovinas; d) transferir la población de células que comprenden células similares a las células madre ingenuas bovinas o uno o más conjuntos de células que comprenden células similares a las células madre ingenuas bovinas a la capa de células alimentadoras; y e) cultivar la población de células que comprenden células similares a las células madre ingenuas bovinas o uno o más conjuntos de células derivadas de embriones en presencia de un medio de crecimiento, donde el medio de crecimiento comprende: i) un componente inhibidor de MEK / ERK, un componente inhibidor de Wnt, un componente inhibidor de PKC, un componente de LIF, y, opcionalmente, un componente inhibidor de ROCK, o ii) un componente de activina A, un componente inhibidor de Wnt, un componente inhibidor de PKC, un componente inhibidor de RAR, opcionalmente, un componente inhibidor de ROCK y, opcionalmente, un componente de LIF, para inducir la fijación y el crecimiento de una o más colonias que comprenden células madre ingenuas bovinas; mediante lo cual se deriva una población de células madre ingenuas bovinas. Reivindicación 47: Un método de preparación de una microgota de una capa de células alimentadoras, que comprende: a) contactar una superficie de crecimiento con un volumen de una solución de recubrimiento; b) incubar la superficie en contacto con la gota de solución de recubrimiento de manera que una capa de solución de recubrimiento se deposite sobre la superficie; c) retirar la solución de recubrimiento y, opcionalmente, lavar la superficie; d) aplicar un primer volumen de un medio de crecimiento, que comprende, opcionalmente, células alimentadoras a la capa de solución de recubrimiento depositada sobre la superficie; e) superponer una capa de un fluido hidrófobo, opcionalmente aceite mineral, sobre el primer volumen de medio de crecimiento; f) agregar un segundo volumen de un medio de crecimiento, que comprende, opcionalmente, células alimentadoras, al primer volumen de medio de crecimiento, donde el primer volumen de medio de crecimiento y/o el segundo volumen de medio de crecimiento comprenden células alimentadoras, mediante lo cual se prepara una microgota que comprende células alimentadoras; e g) incubar la microgota que comprende células alimentadoras de manera que una capa de células alimentadoras se fije a la capa de solución de recubrimiento depositada sobre la superficie; mediante lo cual se prepara una microgota de capa de células alimentadoras.