EXPRESIÓN RECOMBINANTE DEL FACTOR DE CRECIMIENTO DERIVADO DE MIELOIDES

Solicitante

Inventores (5)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

La presente invención se refiere en general al campo de la expresión de genes recombinantes en células huésped. En particular, la invención se refiere a una proteína humana recombinante del factor de crecimiento derivado de mieloides (MYDGF) que presenta un grado mínimo de degradación tras su expresión en una célula huésped. La proteína recombinante es, por lo tanto, muy adecuada para uso médico, en particular para tratar daños en el tejido cardíaco y prevenir la muerte celular en el tejido miocárdico. La invención también proporciona un ácido nucleico que codifica la proteína recombinante y una célula huésped que expresa la proteína recombinante. La invención también proporciona un método para producir la proteína recombinante en una célula huésped. Reivindicación 1: Método para la expresión recombinante de una proteína MYDGF en una célula huésped, caracterizado porque comprende (a) proporcionar una célula huésped que comprenda un ácido nucleico que codifique una proteína (que tras la maduración consista) en 143 aminoácidos que tengan la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 1 o SEQ ID Nº 2; (b) cultivar la célula huésped en condiciones que permitan la expresión de la proteína; (c) aislar de la célula huésped los cuerpos de inclusión que contienen la proteína MYDGF; y (d) solubilizar los cuerpos de inclusión y volver a plegar la proteína MYDGF. Reivindicación 2: Método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa a) comprende (i) proporcionar una célula huésped que comprenda un ácido nucleico que contenga un marco de lectura abierto, flanqueado por un codón de inicio y un codón de parada, según la secuencia de la SEQ ID Nº 11 o la SEQ ID Nº 12, y preferentemente según la secuencia de la SEQ ID Nº 11, unido de forma operable a un promotor; o (ii) proporcionar una célula huésped que comprende un ácido nucleico que codifica una proteína que antes de la maduración consiste en 144 aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 15 o SEQ ID Nº 16, y preferentemente la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 15. Reivindicación 3: Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, caracterizado porque la etapa (a) comprende proporcionar una célula huésped que comprende un ácido nucleico de SEQ ID Nº 7 o SEQ ID Nº 8, y preferentemente un ácido nucleico de SEQ ID Nº 7. Reivindicación 4: Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, caracterizado porque dicha maduración es la eliminación del residuo de metionina N-terminal. Reivindicación 6: Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 5, caracterizado porque comprende además (e) obtener después de la etapa (d) una proteína MYDGF replegada de 143 aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 1 o SEQ ID Nº 2, y preferentemente la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 1. Reivindicación 14: Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 13, caracterizado porque la célula huésped es una célula huésped procariota. Reivindicación 24: Composición obtenible a partir del método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 23, caracterizada porque dicha composición comprende una proteína de 143 aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 1 o SEQ ID Nº 2.