MÉTODO DE LIGACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

Solicitante

Inventores (2)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

La presente invención se refiere a métodos de ligación biocatalítica para producir oligonucleótidos; y polipéptidos de fusión para su uso en dichos métodos. En particular, la presente invención se refiere a métodos de ligación biocatalítica que incorporan regeneración de ATP y a polipéptidos de fusión que comprenden un dominio de polifosfato quinasa y un dominio de ligasa de ácido nucleico dependiente de ATP. Reivindicación 1: Un método de producción de un oligonucleótido a partir de dos o más fragmentos de oligonucleótidos, en donde el método comprende poner en contacto: i. dos o más fragmentos de oligonucleótidos; ii. una ligasa de ácido nucleico dependiente de ATP; iii. una polifosfato quinasa (PPK); iv. trifosfato de adenosina (ATP) y/o monofosfato de adenosina (AMP); v. polifosfato; y vi. un catión divalente; por medio de lo cual se proporciona un oligonucleótido. Reivindicación 7: Una composición que comprende: i. una ligasa de ácido nucleico dependiente de ATP; ii. una PPK; iii. ATP y/o AMP; iv. un catión divalente; y v. polifosfato; opcionalmente en donde la composición además comprende dos o más fragmentos de oligonucleótidos. Reivindicación 10: Un polipéptido de fusión que comprende: a) un dominio PPK; y b) un dominio de ligasa de ácido nucleico dependiente de ATP. Reivindicación 13: Una molécula de ácido nucleico que codifica el polipéptido de fusión de la reivindicación 10 o la reivindicación 11; opcionalmente en donde la molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de ácido nucleico que tiene por lo menos 85% de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico de: (a) cualquiera de las SEQ ID Nº 34 - 36; y/o (b) cualquiera de las SEQ ID Nº 30 - 33 u 87. Reivindicación 14: Un vector que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 13; opcionalmente en donde el vector se selecciona entre un plásmido, un cósmido, un bacteriófago o un vector viral. Reivindicación 15: Una célula huésped que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 13 o el vector de la reivindicación 14; opcionalmente en donde la célula huésped es E. coli.