MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA LA PRODUCCIÓN Y PURIFICACIÓN DE PÉPTIDOS

Solicitante

Inventores (3)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

En la presente se proporcionan métodos para producir péptidos a partir de cuerpos de inclusión. En la presente también se proporcionan variantes de onconasa con propiedades mejoradas. Reivindicación 1: Un método de producción de oligopéptidos que comprende: expresar un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido portador insoluble unido de manera operativa a dos o más oligopéptidos a través de un enlace peptídico, y liberar los dos o más oligopéptidos a partir del polipéptido portador insoluble a través de la escisión química específica de la secuencia del enlace peptídico. Reivindicación 22: Un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido portador insoluble unido de manera operativa a dos o más oligopéptidos, en donde la unión operativa entre los dos o más oligopéptidos y el polipéptido portador insoluble comprende un enlace peptídico que es capaz de escisión química específica de la secuencia. Reivindicación 40: Un método de liberación de un oligopéptido fusionado a un polipéptido portador insoluble, que forma cuerpos de inclusión en una célula que comprende a) expresar un polipéptido de fusión que comprende el oligopéptido unido de manera operativa al polipéptido portador insoluble, en donde la unión operativa es un enlace peptídico que es capaz de escisión química específica de la secuencia a través de ácido acético, b) purificar los cuerpos de inclusión, y c) incubar los cuerpos de inclusión con ácido a una temperatura mayor a 50ºC durante al menos una hora, en donde el oligopéptido se libera a partir del polipéptido de fusión a través de escisión específica de la secuencia del enlace peptídico. Reivindicación 92: Un método de producción de un polipéptido de fusión que comprende expresar el polipéptido de fusión que comprende un oligopéptido unido de manera operativa al C-terminal de un polipéptido de onconasa, en donde el polipéptido de onconasa comprende una o más sustituciones de aminoácidos en los 11 aminoácidos N-terminales en comparación con la SEQ ID Nº 1, en donde la proteína de fusión onconasa-oligopéptido que comprende el polipéptido de onconasa se expresa a un nivel más alto que una proteína de fusión que comprende una onconasa de SEQ ID Nº 1 cuando se expresa bajo las mismas condiciones. Reivindicación 109: Un polipéptido de onconasa que comprende una o más sustituciones de aminoácidos en los 11 aminoácidos N-terminales del polipéptido de onconasa en comparación con la SEQ ID Nº 1, en donde el polipéptido de onconasa se expresa a un nivel más alto que una proteína onconasa de SEQ ID Nº 1 cuando se expresa bajo las mismas condiciones. Reivindicación 128: Un ácido nucleico que codifica un polipéptido de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 22 - 39, la onconasa de la reivindicación 109 o de la reivindicación 110, o el polipéptido de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 111 - 126. Reivindicación 129: Una célula que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 128. Reivindicación 138: Un método de producción de un polipéptido de fusión que comprende: expresar el polipéptido de fusión que comprende un oligopéptido unido de manera operativa al C-terminal o al C-terminal de un polipéptido de TAF modificado, en donde el polipéptido de TAF modificado comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia con la SEQ ID Nº 23. Reivindicación 155: Un polipéptido de TAF modificado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia con la SEQ ID Nº 23. Reivindicación 173: Un ácido nucleico que codifica un polipéptido de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 22 - 39, el polipéptido de RAF modificado de la reivindicación 155 o de la reivindicación 156, o el polipéptido de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 157 - 172. Reivindicación 174: Una célula que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 173.