MITIGACIÓN DE LA FRAGMENTACIÓN DE PROTEÍNAS TERAPÉUTICAS DURANTE LOS PROCESOS DE RECOLECCIÓN DE CULTIVOS CELULARES

Solicitante

Inventores (5)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

En la presente se describen métodos para recolectar una proteína recombinante que comprende un sitio de escisión de asparaginil endopeptidasa (AEP), así como métodos para inhibir la escisión de una proteína recombinante que comprende un sitio de escisión de AEP, durante un proceso de biofabricación. Reivindicación 1: Un método para recolectar una proteína recombinante durante un proceso de biofabricación que comprende: establecer un cultivo celular inoculando un biorreactor con células de mamífero que expresan la proteína recombinante; mantener el cultivo celular durante una fase de crecimiento y una fase de producción, en donde un inhibidor de proteasa exógeno se mezcla opcionalmente con el cultivo celular durante la fase de crecimiento y/o durante o después de la fase de producción; enfriar el cultivo celular, en donde un nivel de oxígeno disuelto de aproximadamente 64 mmHg a aproximadamente 128 mmHg se mantiene opcionalmente en el cultivo celular durante el enfriamiento; mezclar una solución ácida con el cultivo celular para obtener un cultivo celular acidificado con un pH de aproximadamente 4.6 a aproximadamente 5.3; y incubar el cultivo celular acidificado para inducir la aglomeración de una o más impurezas del cultivo celular, en donde la proteína recombinante comprende un sitio de escisión de asparaginil endopeptidasa (AEP). Reivindicación 11: Un método para inhibir la escisión de una proteína recombinante que comprende un sitio de escisión de asparaginil endopeptidasa (AEP) durante un proceso de biofabricación que comprende una precipitación ácida, el método comprende: medir una cantidad o actividad de AEP y/o una cantidad de uno o más fragmentos de la proteína recombinante en una muestra aislada de un cultivo celular, recolección u operación de purificación del proceso de biofabricación; y ajustar el pH de precipitación ácida de aproximadamente 4.6 a aproximadamente 5.3 si la cantidad o actividad de AEP y/o la cantidad del uno o más fragmentos está por encima de un umbral.