SELECTIVIDAD EFICIENTE DE PROTEÍNAS RECOMBINADAS

Solicitante

Inventores (4)

Clasificación Internacional de Patentes (IPC)

Resumen técnico

La invención proporciona un nuevo sistema de expresión que comprende un marcador de selección mamífero que favorece deseables modificaciones postraducción de glicoproteínas. En particular, la invención incluye métodos y composiciones para la expresión recombinada óptima de proteína en células mamíferas, mediante el empleo de un sistema marcador de selección sobre la base de genes GPT de origen mamífero. La invención incluye métodos que facilitan la selectividad y mejoradas copias de expresión, al igual que el rendimiento de proteína de proteínas recombinadas en células mamíferas, y métodos de uso de sistemas de expresión de GPT. Reivindicación 1: Una célula aislada, caracterizada porque comprende un gen de resistencia a tunicamicina (Tn) mamífero que codifica una proteína que tiene por lo menos 93% de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 3, funcionalmente ligado a un gen de interés (GOI) y por lo menos un elemento regulador. Reivindicación 22: Un método de producción de una proteína recombinada de interés (POI), caracterizado porque el método comprende: a. la provisión de una célula huésped mamífera que codifica una molécula de ácido nucleico que comprende (i) un gen de resistencia a tunicamicina (Tn) mamífero y (ii) un gen que codifica la POI; b. el cultivo de la célula en presencia de una primera concentración de Tn; c. el aislamiento de una población de células que expresan por lo menos una copia del gen de resistencia a Tn; d. el cultivo de la población de células en presencia de concentraciones en incremento de Tn, donde el incremento de la concentración de Tn aumenta la producción de la POI; y e. el aislamiento del POI del cultivo de células. Reivindicación 41: Un método de glicosilación de un sustrato de proteína de N-glicano, caracterizado porque el método comprende: a. la provisión de una célula huésped mamífera que codifica una molécula de ácido nucleico que comprende un gen de resistencia a tunicamicina (Tn) mamífero funcionalmente ligado a un gen que codifica el sustrato de proteína que necesita glicosilación; b. el cultivo de la célula en presencia de una primera concentración de Tn; c. el aislamiento de una población de células que expresan por lo menos una copia del gen de resistencia a Tn; d. el cultivo de la población de células en presencia de concentraciones en incremento de Tn, donde el incremento de la concentración de Tn aumenta la producción de la POI; y e. el aislamiento del sustrato de proteína del cultivo de células. (62) AR102333A1